Produção de massa de células permeabilizadas de Kluyveromyces lactis e atividade catalítica da bgalactosidase

Resumo

A produção de massa de célula permeabilizada de Kluyveromyces lactis contendo a enzimagalactosidase e sua atividade catalítica na hidrólise de lactose foi realizada. Para obtenção da massa de célula permeabilizada, células foram produzidas, crescendo em soro de leite UF estéril. Para promover a permeabilização da membrana, células foram tratadas com uma solução etanol 50% para facilitar o contato entre a enzima e o substrato no processo de hidrólise da lactose. A atividade catalítica da enzima na hidrólise de lactose foi obtida pela relação linear entre a velocidade de reação e peso seco em mg de célula permeabilizada. A massa de 1mg de células permeabilizadas equivaleu a 0,32 unidades de atividade de enzima. O efeito da suspensão de célula permeabilizada na velocidade inicial de reação foi estudado utilizando diferentes concentrações de lactose (1, 40, 100 e 140 mM) e suspensões de células permeabilizadas que variaram de 0,1 a 3 mg/ml. As reações foram acompanhadas no espectofotômetro DU em 510nm, que forneceu uma curva da variação de absorbância com o tempo de reação. A inclinação da reta apresentada por cada curva correspondeu as velocidades iniciais para cada concentração de célula permebilizada e de lactose. Foi utilizado nessa análise um reagente colorimétrico GOP-PAP que reagiu especificamente com a glicose presente no meio. Para conversão da leitura de absorvância em unidades de mM glicose, foi feita uma curva padrão de glicose. A concentração de 1mg/ml de célula permeabilizada adicionada à mistura de reação, foi selecionada pela sua relação linear com a velocidade de reação para concentrações mínimas (1 mM) e extremas (140 mM) de lactose. Valores abaixo de 1mg/ml foram apropriados para a reação linear entre velocidade e concentração inicial de enzima.