Cinética de inibição por galactose e glicose na hidrólise de lactose por b-galactosidase em massa de células permeabilizadas de Kluyveromyces lactis

Resumo

O efeito de diferentes concentrações de galactose, glicose e de mistura de galactose e glicose na cinética de hidrólise de lactose por b-galactosidase utilizando células permeabilizadas de Kluyveromyces lactis como biocatalisador foi realizado. Os experimentos foram realizados em temperatura ambiente (25ºC), utilizando uma suspensão de 1mg/ml de células permeabilizadas em tampão fosfato na mistura de reação. Para o efeito de galactose na atividade da enzima, foram combinadas diferentes concentrações de lactose (0, 1, 5, 10, 20, 30 e 40 mM) com diferentes concentrações de galactose (0, 1, 5, 10, 20, 30 e 40 mM). A reação foi acompanhada em espectofototrômetro DU em 510 nm pela medida de glicose liberada. As unidades de absorvâncias foram transformadas em mM de glicose, através de uma curva de calibração apropriada. Durante os estudos do efeito de galactose sobre a atividade da b-galactosidase, foi utilizado um programa estatístico de computador que auxiliou no cálculo dos coeficientes cinéticos (V_máx, K_m e K_i) de forma precisa e correta e também ajudou na escolha e definição de um modelo matemático mecanístico aplicável no entendimento do processo de hidrólise de lactose levando em consideração a forma de inibição causado pela presença de galactose. O tipo de inibição competitiva ou não-competitiva foi definido pelo menor valor apresentado pela soma de quadrados do resíduo pelo programa SAS-NILN. Os coeficientes cinéticos V_máx, K_m e K_i também estimadas pelo mesmo programa , corresponderam respectivamente a 0,291 + 0,01mM/min; 2,536 + 0,412 mM e 10,88 + 8,86 mM no intervalo de confiança de 95%. O tipo de inibição causado pela presença de galactose foi competitiva para b-galactosidase de Kluyveromyces lactis.